Producción eficiente de ingeniería de un apoptin de la anemia infecciosa aviar en una cepa recombinante de E. coli para las aplicaciones terapéuticas de tumores
Meng-Shiou Lee, Fang-Chun Sun, Huang Chi-Hung, Lien Yi-Yang, Feng Shin-Huei, Lai Guan-Hua, Lee Meng-Shiunn, Chao Jung, Su-Jien Chen, Jason TC Tzen y Hao Yuan- Cheng
BMC Biotecnología 2012, 12:27 doi: 10.1186/1472-6750-12-27
Apoptin, una proteína no estructural codificada por el gen VP3 de pollo anemia virus (CAV), se ha demostrado que no sólo inducir la apoptosis cuando se introduce en los precursores de timocitos de pollo, pero se ha encontrado para matar específicamente a las células cancerosas humanas, células del tumor y se transforma células sin afectar a la proliferación de las células normales. Esta característica apoptótica tumor específico de la proteína potencialmente puede permitir el desarrollo de un fármaco proteína que tiene aplicaciones en la terapia de tumores. Sin embargo, varios problemas importantes, que incluyen la expresión de los pobres y solubilidad de la proteína deficiente, han obstaculizado la producción de apoptin en las bacterias.
Resultados
Significativamente mayor de expresión recombinante apoptin de longitud completa que se originó a partir de la anemia infecciosa aviar se demostró mediante un sistema de expresión de E. coli. El gen de la CAV VP3 se fusionó con una secuencia sintética que contiene un activador de la trans-acción de la transcripción (TAT), dominio de la proteína de transducción (PTD). La construcción resultante se clonó en diversos vectores de expresión diferentes y éstas se han expresado en diversas cepas de E. coli. La expresión de la TAT-Apoptin en E. coli se incrementó significativamente cuando TAT Apoptin se fusionó con GST-etiqueta en lugar de un Su-etiqueta. Cuando los diversos codones raros de aminoácidos de apoptin se optimizaron, el nivel de expresión de la GST-TAT-Apoptinopt en E. coli BL21 (DE3) fue significativamente más aumentada. El nivel de proteína más alta expresión obtenida fue 8,33 g / l por litro de cultivo bacteriano después de la inducción con IPTG 0,1 mM durante 4 horas a 25 ° C. Además, aproximadamente el 90% de la expresada GST-TAT-Apoptinopt en estas condiciones era soluble. Después de la purificación por cromatografía de afinidad GST, el recombinante purificada TAT Apoptinopt proteína se utilizó para evaluar la actividad apoptótica la proteína recombinante en células tumorales. Los resultados demostraron que la E. coli expresan GST-TAT-apoptinopt mostró que la actividad apoptótica y fue capaz de inducir la leucemia humana premyelocytic células HL-60 para entrar en apoptosis.
Tomado de BMC
ver mas en: http://www.biomedcentral.com/1472-6750/12/27/abstract
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